318C + 全自動(dòng)酶標(biāo)儀數(shù)據(jù)處理操作：吸光度值讀取、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制與濃度計(jì)算步驟
上海儀器網(wǎng) / 2025-09-17
318C + 全自動(dòng)酶標(biāo)儀是臨床免疫檢測(cè)、科研實(shí)驗(yàn)中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的核心設(shè)備，其數(shù)據(jù)處理環(huán)節(jié)（吸光度讀取、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、濃度計(jì)算）直接決定檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性 —— 若操作不當(dāng)（如空白扣除錯(cuò)誤、曲線擬合模型選錯(cuò)），可能導(dǎo)致假陽(yáng)性 / 假陰性結(jié)果，影響臨床診斷或?qū)嶒?yàn)結(jié)論。本文基于 318C + 儀器自帶的 “ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件”，詳解從吸光度讀取到濃度計(jì)算的全流程操作要點(diǎn)，同時(shí)說(shuō)明數(shù)據(jù)驗(yàn)證與誤差控制方法，確保數(shù)據(jù)處理合規(guī)、可靠。?
一、吸光度值讀取：基礎(chǔ)數(shù)據(jù)采集與預(yù)處理?
（一）檢測(cè)后數(shù)據(jù)調(diào)取?
- 數(shù)據(jù)進(jìn)入路徑：儀器完成檢測(cè)后，自動(dòng)跳轉(zhuǎn)至 “檢測(cè)結(jié)果” 界面；若需調(diào)取歷史數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊軟件左側(cè) “數(shù)據(jù)管理”→“檢測(cè)記錄”，通過(guò) “檢測(cè)日期、項(xiàng)目名稱(chēng)、操作員” 等篩選條件，找到目標(biāo)檢測(cè)任務(wù)（建議命名規(guī)則：項(xiàng)目名稱(chēng) + 日期 + 批次，如 “新冠抗體檢測(cè)_20240520_01”）；?
- 原始數(shù)據(jù)查看：在 “原始數(shù)據(jù)” tab 頁(yè)，可查看每孔的吸光度值（A 值），界面按酶標(biāo)板孔位（1-12 列、A-H 行）矩陣顯示，同時(shí)標(biāo)注 “空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔”（檢測(cè)前需在 “樣品設(shè)置” 界面預(yù)設(shè)孔位屬性，避免混淆）；需重點(diǎn)關(guān)注空白孔 A 值（通常要求≤0.1Abs，若超出范圍，需排查是否存在試劑污染或光路干擾）。?
（二）吸光度值預(yù)處理（關(guān)鍵步驟）?
- 空白扣除設(shè)置：點(diǎn)擊 “數(shù)據(jù)預(yù)處理”→“空白扣除”，選擇扣除方式：?
- 若為 “單空白孔”（如 A1 孔為空白），選擇 “單點(diǎn)扣除”，軟件自動(dòng)用所有孔 A 值減去空白孔 A 值；?
- 若為 “復(fù)空白孔”（如 A1、A2 均為空白），選擇 “平均扣除”，軟件先計(jì)算空白孔 A 值平均值，再進(jìn)行整體扣除；?
注意：空白孔需僅含稀釋液 / 緩沖液，不可混入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，否則會(huì)導(dǎo)致扣除后數(shù)據(jù)偏差；?
- 異常值剔除：查看標(biāo)準(zhǔn)品孔 A 值，若某一標(biāo)準(zhǔn)品孔 A 值與同濃度其他孔（如復(fù)孔）偏差＞10%（計(jì)算公式：|A 單 - A 平均 |/A 平均 ×100%），需判斷是否為操作誤差（如加樣量不準(zhǔn)、孔內(nèi)有氣泡）：?
- 若確認(rèn)是偶然誤差，點(diǎn)擊 “異常值剔除”，勾選該孔后選擇 “剔除”，軟件將用剩余復(fù)孔平均值參與后續(xù)計(jì)算；?
- 若無(wú)法判斷，需重新檢測(cè)該標(biāo)準(zhǔn)品孔，避免因異常值導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳。?
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：模型選擇與擬合驗(yàn)證?
（一）標(biāo)準(zhǔn)品濃度錄入?
- 濃度設(shè)置：點(diǎn)擊 “標(biāo)準(zhǔn)曲線”→“濃度設(shè)置”，按標(biāo)準(zhǔn)品說(shuō)明書(shū)錄入對(duì)應(yīng)孔位的濃度值（如標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度為 0、1、5、10、20、50ng/mL，需與酶標(biāo)板孔位一一對(duì)應(yīng)，不可錯(cuò)位）；若為倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，可選擇 “自動(dòng)計(jì)算濃度”，輸入初始濃度與稀釋倍數(shù)（如初始濃度 100ng/mL，稀釋倍數(shù) 1:2，軟件自動(dòng)生成 0、3.125、6.25、12.5、25、50ng/mL 梯度）；?
- 單位設(shè)置：根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目選擇濃度單位（如 ng/mL、U/mL、μmol/L），確保與后續(xù)樣品濃度單位一致，避免單位混淆導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤。?
（二）曲線擬合模型選擇與擬合?
- 模型適配原則：根據(jù) ELISA 實(shí)驗(yàn)類(lèi)型選擇擬合模型，318C + 支持 5 種常用模型，適配場(chǎng)景如下：?
- 線性回歸（Linear）：適用于標(biāo)準(zhǔn)品 A 值與濃度呈嚴(yán)格線性關(guān)系（如部分小分子抗原檢測(cè)，R² 需≥0.995）；?
- 四參數(shù)邏輯斯蒂回歸（4-PL）：適用于 A 值與濃度呈 “S” 型曲線（多數(shù) ELISA 檢測(cè)，如抗體、大分子抗原，可自動(dòng)擬合上平臺(tái)期、下平臺(tái)期，擬合精度高）；?
- 三參數(shù)邏輯斯蒂回歸（3-PL）：適用于無(wú)下平臺(tái)期的 “S” 型曲線，常見(jiàn)于低濃度標(biāo)準(zhǔn)品 A 值接近空白的場(chǎng)景；?
操作提示：點(diǎn)擊 “模型選擇”，軟件會(huì)自動(dòng)推薦擬合模型（基于標(biāo)準(zhǔn)品 A 值分布），但需人工驗(yàn)證擬合效果；?
- 曲線擬合與驗(yàn)證：點(diǎn)擊 “擬合曲線”，軟件生成標(biāo)準(zhǔn)曲線圖形（X 軸為濃度，Y 軸為扣除空白后的 A 值），同時(shí)顯示擬合參數(shù)：?
- 線性模型：查看 R²（決定系數(shù)，≥0.99 為合格）、截距（接近 0 為宜）、斜率（符合試劑盒預(yù)期范圍）；?
- 4-PL 模型：查看相關(guān)系數(shù)（R≥0.998）、EC50（半數(shù)有效濃度，需在標(biāo)準(zhǔn)品濃度范圍內(nèi)）；?
若擬合參數(shù)不達(dá)標(biāo)（如 R²＜0.98），需檢查：①標(biāo)準(zhǔn)品濃度錄入是否錯(cuò)誤；②異常值是否已剔除；③模型選擇是否適配，必要時(shí)重新進(jìn)行檢測(cè)。?
三、樣品濃度計(jì)算：結(jié)果生成與數(shù)據(jù)驗(yàn)證?
（一）自動(dòng)計(jì)算與稀釋倍數(shù)校正?
- 濃度自動(dòng)計(jì)算：擬合曲線合格后，軟件自動(dòng)根據(jù)樣品孔的扣除空白 A 值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算濃度，結(jié)果顯示在 “樣品結(jié)果” tab 頁(yè)，同時(shí)標(biāo)注 “未稀釋濃度”；?
- 稀釋倍數(shù)校正：若樣品檢測(cè)前進(jìn)行了稀釋?zhuān)ㄈ缪鍢悠?1:10 稀釋?zhuān)椟c(diǎn)擊 “稀釋校正”，輸入對(duì)應(yīng)樣品孔的稀釋倍數(shù)（如 10），軟件自動(dòng)計(jì)算 “實(shí)際濃度”（實(shí)際濃度 = 未稀釋濃度 × 稀釋倍數(shù)）；?
注意：需在 “樣品設(shè)置” 界面提前標(biāo)注稀釋樣品的孔位，避免漏校正導(dǎo)致結(jié)果偏低。?
（二）結(jié)果判斷與數(shù)據(jù)導(dǎo)出?
- 結(jié)果判讀：根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)（如臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)、試劑盒說(shuō)明書(shū)），設(shè)置 “陽(yáng)性 / 陰性閾值” 或 “參考范圍”：?
- 如新冠抗體檢測(cè)：若濃度≥10ng/mL 為陽(yáng)性，＜10ng/mL 為陰性，軟件可自動(dòng)標(biāo)注 “陽(yáng)性（+）”“陰性（-）”；?
- 若樣品濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線量程（如高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度 50ng/mL），結(jié)果會(huì)顯示 “＞50ng/mL”，需稀釋樣品后重新檢測(cè)；若低于最低標(biāo)準(zhǔn)品濃度（如＜1ng/mL），顯示 “＜1ng/mL”，需確認(rèn)是否為真陰性或檢測(cè)靈敏度不足；?
- 數(shù)據(jù)導(dǎo)出與保存：點(diǎn)擊 “數(shù)據(jù)導(dǎo)出”，選擇導(dǎo)出格式：?
- “Excel 格式”：包含原始 A 值、空白扣除后 A 值、標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)、樣品濃度、判讀結(jié)果，可用于實(shí)驗(yàn)報(bào)告或數(shù)據(jù)存檔；?
- “PDF 報(bào)告”：自動(dòng)生成標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告（含檢測(cè)項(xiàng)目、日期、操作員、標(biāo)準(zhǔn)曲線圖形、樣品結(jié)果），可直接打印；?
導(dǎo)出后需核對(duì) 1-2 個(gè)樣品的手動(dòng)計(jì)算結(jié)果（按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程手動(dòng)代入 A 值），與軟件計(jì)算結(jié)果對(duì)比，偏差需≤5%，確保數(shù)據(jù)無(wú)誤。?
四、數(shù)據(jù)處理注意事項(xiàng)與常見(jiàn)問(wèn)題解決?
- 空白孔設(shè)置：每塊酶標(biāo)板需單獨(dú)設(shè)置空白孔，不可用其他批次空白值替代（不同批次試劑空白可能存在差異）；?
- 復(fù)孔數(shù)據(jù)處理：樣品若為復(fù)孔檢測(cè)，軟件默認(rèn)顯示平均值，需查看復(fù)孔偏差（≤10% 為合格），偏差過(guò)大需重新加樣檢測(cè)；?
- 曲線復(fù)用問(wèn)題：標(biāo)準(zhǔn)曲線僅可用于同批次檢測(cè)（同一次開(kāi)機(jī)、同批次試劑），不可跨批次復(fù)用（試劑穩(wěn)定性、儀器狀態(tài)變化會(huì)導(dǎo)致曲線偏移）；?
- 樣品濃度為 “0”：檢查是否忘記空白扣除，或樣品孔 A 值等于空白孔 A 值（可能為樣品未加樣或試劑失效）；?
- 標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)擬合結(jié)果：檢查標(biāo)準(zhǔn)品濃度是否全部為 0，或標(biāo)準(zhǔn)品孔 A 值均低于空白孔 A 值（標(biāo)準(zhǔn)品失效，需更換）。?
綜上，318C + 全自動(dòng)酶標(biāo)儀的數(shù)據(jù)處理需嚴(yán)格遵循 “數(shù)據(jù)預(yù)處理 - 曲線擬合 - 濃度計(jì)算 - 結(jié)果驗(yàn)證” 流程，核心在于確保原始數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、模型選擇適配、結(jié)果校正完整。通過(guò)規(guī)范操作，可有效降低數(shù)據(jù)處理誤差，為臨床診斷、科研實(shí)驗(yàn)提供可靠的量化依據(jù)，適用于醫(yī)院檢驗(yàn)科、疾控中心、高校實(shí)驗(yàn)室等場(chǎng)景。
