基于 CNW 黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱 SBEQ-CC15001 的食用油檢測前處理應(yīng)用方案
上海儀器網(wǎng) / 2025-10-09
一、方案背景與設(shè)備優(yōu)勢?
食用油（如花生油、玉米油、葵花籽油等）在生產(chǎn)、儲存過程中易受黃曲霉污染，產(chǎn)生黃曲霉毒素 B1（AFB1）。AFB1 具有強(qiáng)毒性與致癌性，是食用油安全檢測的關(guān)鍵指標(biāo)（國家食品安全標(biāo)準(zhǔn) GB 2716-2018 規(guī)定食用油中 AFB1 含量≤5.0μg/kg）。傳統(tǒng)檢測前處理方法（如液 - 液萃取、固相萃取）存在凈化效率低、雜質(zhì)殘留多、操作復(fù)雜等問題，易干擾后續(xù)儀器檢測（如 HPLC、LC-MS/MS）結(jié)果。?
CNW SBEQ-CC15001 黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱憑借高特異性免疫吸附技術(shù)，可高效解決食用油前處理痛點(diǎn)，核心優(yōu)勢顯著：其一，特異性強(qiáng)，柱內(nèi)抗體僅與 AFB1 特異性結(jié)合，對食用油中的油脂、色素、脂肪酸等雜質(zhì)無吸附，凈化效果優(yōu)異；其二，富集效率高，對 AFB1 的回收率穩(wěn)定在 85%-110%，且檢測限低至 0.1μg/kg，滿足痕量檢測需求；其三，操作便捷，無需復(fù)雜前處理設(shè)備，僅需簡單離心、過柱步驟即可完成凈化，單個(gè)樣本前處理時(shí)間縮短至 30 分鐘以內(nèi)；其四，兼容性廣，適配多種食用油基質(zhì)（包括壓榨油、浸出油、調(diào)和油），且可與 HPLC、LC-MS/MS 等主流檢測儀器無縫銜接。?
二、適用范圍與檢測目標(biāo)?
本方案適用于花生油、玉米油、大豆油、葵花籽油、橄欖油等常見食用油中黃曲霉毒素 B1 的檢測前處理，尤其適用于油脂含量高、雜質(zhì)復(fù)雜的壓榨類食用油。檢測目標(biāo)為通過免疫親和柱凈化，去除食用油中的油脂、色素、蛋白質(zhì)等干擾雜質(zhì)，富集 AFB1，得到純凈的待測液，為后續(xù)儀器檢測提供高質(zhì)量樣本，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD≤5%）。?
三、詳細(xì)操作流程?
（一）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?
- 試劑與耗材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備 CNW SBEQ-CC15001 免疫親和柱（需在 2-8℃冷藏保存，使用前取出回溫至室溫）、正己烷（分析純）、甲醇（色譜純）、磷酸二氫鉀（分析純）、超純水（電阻率≥18.2MΩ?cm）、0.22μm 有機(jī)相濾膜。配置磷酸鹽緩沖液（PBS）：稱取 0.2g 磷酸二氫鉀，加入 100mL 超純水溶解，用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 7.0，搖勻后備用；配置甲醇 - 水洗脫液（80:20，v/v）：量取 80mL 甲醇與 20mL 超純水混合，搖勻后備用。?
- 儀器與容器準(zhǔn)備：準(zhǔn)備離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥5000r/min）、固相萃取裝置（帶負(fù)壓調(diào)節(jié)功能）、10mL 移液管、50mL 離心管、10mL 收集管、玻璃漏斗。將離心管、收集管置于 121℃高壓滅菌 20 分鐘，冷卻后備用；檢查固相萃取裝置密封性，確保無漏氣，將免疫親和柱固定在裝置支架上，備用。?
- 樣本準(zhǔn)備：選取具有代表性的食用油樣本（如從不同批次、不同儲存位置取樣，混合均勻），量取 10mL 樣本置于 50mL 離心管中，加入 20mL 正己烷，用移液管輕輕攪拌 1 分鐘，使樣本充分溶解，避免劇烈攪拌產(chǎn)生氣泡。若樣本中存在固體雜質(zhì)（如壓榨油中的殘?jiān)柘韧ㄟ^玻璃漏斗過濾，去除雜質(zhì)后再進(jìn)行后續(xù)操作。?
（二）前處理操作步驟?
- 樣本提取：向裝有食用油 - 正己烷混合液的離心管中，加入 10mL PBS 緩沖液，蓋緊管蓋，顛倒離心管 10 次（每次顛倒后停留 2 秒），確保兩相充分混合，然后將離心管放入離心機(jī)，設(shè)定轉(zhuǎn)速 5000r/min，離心 10 分鐘，使混合液分層（上層為正己烷 - 油相，下層為 PBS - 水相）。離心完成后，用移液管緩慢吸取下層水相（避免吸入上層油相），轉(zhuǎn)移至另一干凈的 50mL 離心管中，若水相渾濁，可再次離心 5 分鐘，直至水相澄清。?
- 免疫親和柱凈化：打開固相萃取裝置負(fù)壓開關(guān)，調(diào)節(jié)負(fù)壓至 0.02-0.03MPa（確保液體流速穩(wěn)定）。用 5mL 超純水緩慢沖洗免疫親和柱（流速 1-2 滴 / 秒），活化柱內(nèi)抗體，待柱內(nèi)液體流盡后，關(guān)閉負(fù)壓。將提取后的水相樣本緩慢注入免疫親和柱（流速 1 滴 / 秒），使樣本中的 AFB1 與柱內(nèi)抗體充分結(jié)合，待樣本全部流入柱內(nèi)后，用 10mL 超純水分兩次沖洗柱子（每次 5mL，流速 2 滴 / 秒），去除柱內(nèi)殘留的雜質(zhì)與油脂，沖洗完成后，保持負(fù)壓狀態(tài) 30 秒，排空柱內(nèi)殘留液體。?
- 目標(biāo)物洗脫：關(guān)閉固相萃取裝置負(fù)壓，將干凈的 10mL 收集管置于免疫親和柱下方，用 3mL 甲醇 - 水洗脫液緩慢注入柱子（流速 1 滴 / 秒），待洗脫液全部流入柱內(nèi)后，停留 1 分鐘，確保 AFB1 完全從抗體上解離，然后打開負(fù)壓，調(diào)節(jié)負(fù)壓至 0.01-0.02MPa，使洗脫液緩慢流入收集管。洗脫完成后，用 1mL 超純水沖洗柱子，將沖洗液合并至收集管中，得到 AFB1 待測液。?
- 待測液處理：將收集管中的待測液用 0.22μm 有機(jī)相濾膜過濾，去除微小雜質(zhì)與顆粒，避免堵塞檢測儀器色譜柱。過濾后的待測液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，標(biāo)注樣本編號、處理日期及操作人員，若不立即檢測，需將待測液置于 2-8℃冷藏保存，保存時(shí)間不超過 24 小時(shí)。?
（三）操作后處理?
- 耗材處理：使用過的免疫親和柱、離心管、移液管等耗材，需放入專用醫(yī)療廢物袋中，進(jìn)行高溫滅菌處理（121℃，30 分鐘）后，再按有害廢物規(guī)范處置，避免 AFB1 殘留造成環(huán)境污染。?
- 儀器清潔：用甲醇擦拭固相萃取裝置支架與管路，去除殘留的樣本與試劑，然后用超純水沖洗管路 3 次，晾干后備用；離心機(jī)轉(zhuǎn)子用 75% 乙醇溶液消毒，避免交叉污染；移液管、收集管等玻璃器皿用鉻酸洗液浸泡 2 小時(shí)，再用超純水沖洗至中性，晾干后存放。?
- 記錄與追溯：在實(shí)驗(yàn)記錄本中詳細(xì)記錄操作信息，包括樣本名稱、批次、處理體積、試劑用量、離心參數(shù)、洗脫體積、待測液保存條件及操作過程中出現(xiàn)的異常情況（如柱堵塞、洗脫液渾濁等），便于后續(xù)檢測結(jié)果追溯與問題排查。?
四、方案優(yōu)勢與注意事項(xiàng)?
（一）方案優(yōu)勢?
- 凈化效果優(yōu)異：免疫親和柱特異性吸附 AFB1，可有效去除食用油中的油脂、色素等雜質(zhì)，經(jīng)凈化后的待測液澄清透明，無雜質(zhì)干擾，后續(xù) HPLC 檢測時(shí)基線平穩(wěn)，峰形對稱，檢測結(jié)果準(zhǔn)確性高。?
- 操作高效便捷：相較于傳統(tǒng)前處理方法，本方案步驟簡化，單個(gè)樣本處理時(shí)間僅需 30 分鐘，且無需復(fù)雜儀器，普通實(shí)驗(yàn)室即可開展操作，大幅提升檢測效率，適合批量樣本處理（如每日處理 50-100 個(gè)樣本）。?
- 回收率穩(wěn)定：AFB1 回收率穩(wěn)定在 85%-110%，符合國家檢測標(biāo)準(zhǔn)要求（GB/T 5009.22-2016），且重復(fù)性好（RSD≤5%），確保不同操作人員、不同時(shí)間檢測結(jié)果的一致性。?
（二）注意事項(xiàng)?
- 試劑與耗材規(guī)范使用：甲醇、正己烷等試劑需使用指定純度級別，避免試劑雜質(zhì)影響凈化效果；免疫親和柱需嚴(yán)格按照儲存條件保存，過期或變質(zhì)的柱子禁止使用；濾膜需選擇有機(jī)相類型，避免使用水相濾膜導(dǎo)致待測液污染。?
- 流速控制關(guān)鍵：樣本上柱、沖洗、洗脫過程中需嚴(yán)格控制流速（1-2 滴 / 秒），流速過快會導(dǎo)致 AFB1 與抗體結(jié)合不充分或洗脫不完全，降低回收率；流速過慢則會延長處理時(shí)間，影響效率。可通過固相萃取裝置負(fù)壓精準(zhǔn)調(diào)節(jié)流速，確保流速穩(wěn)定。?
- 避免交叉污染：不同樣本處理時(shí)需更換離心管、收集管及移液管吸頭，免疫親和柱為一次性使用，禁止重復(fù)使用；操作過程中需佩戴一次性手套、口罩，避免手部接觸樣本與試劑，防止交叉污染。?
- 異常情況處理：若樣本上柱時(shí)出現(xiàn)堵塞，需降低負(fù)壓，緩慢推動樣本，若仍無法解決，需重新提取樣本；若洗脫液渾濁，需重新過濾待測液，避免雜質(zhì)進(jìn)入檢測儀器；若回收率低于 85%，需檢查免疫親和柱是否過期、試劑是否變質(zhì)或操作步驟是否有誤，排除問題后重新處理樣本。?
五、應(yīng)用場景拓展?
本方案不僅適用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)食用油檢測前處理，還可拓展至食品監(jiān)管、食用油生產(chǎn)企業(yè)自檢等場景。例如，在食品藥品監(jiān)管部門開展的食用油質(zhì)量抽檢中，可快速處理大量樣本，為執(zhí)法提供及時(shí)、準(zhǔn)確的檢測數(shù)據(jù)；在食用油生產(chǎn)企業(yè)，可將本方案融入生產(chǎn)過程質(zhì)量控制，對原料（如花生、大豆）及成品進(jìn)行 AFB1 檢測，從源頭把控產(chǎn)品安全。通過標(biāo)準(zhǔn)化的前處理流程與免疫親和柱的穩(wěn)定性能，CNW SBEQ-CC15001 免疫親和柱可為食用油中黃曲霉毒素 B1 檢測提供可靠技術(shù)支撐，保障食用油消費(fèi)安全。?
